CRISPR Stable Knockin Cell Line Generation
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产品名称: CRISPR Stable Knockin Cell Line Generation
产品型号: C408
产品展商: ABM
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简单介绍
CRISPR Stable Knockin Cell Line Generation
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CRISPR Stable Knockin Cell Line Generation
的详细介绍
Knock-in Data
Fluorescence image of HEK293 cell line showing RFP knock-in using CRISPR CAS:9 mediated homology directed repair mechanism.
Left: RFP knock-in at the AAVS1 (Safe-harbor site) locus.
Right: RFP knock-in at a non-AAVS1 site (random insertion).
Service Details
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Our Basic Package (C408) Includes
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Deliverables
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Lead Time
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A. Target DNA Vector Creation
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gRNA Design and Construction (2-4 gRNAs)
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Donor DNA Construction (knock-in or point mutation)
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5-8 weeks
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B. Cell Culture, Transfection, Optimization
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3-5 weeks
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C. Clonal Selection and Screening
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KI Confirmation by PCR or Sequencing
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9-12 weeks
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D. Clonal expansion and cryopreservation
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Genetically Engineered Cell Line (up to 2 vials 1x106 cells/vial) and Custom Report
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3-4 weeks
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Add-On Services^
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Quantity
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Cat. No.
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Price
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Cell Line of Your Choice for Gene Editing#
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1 Cell Line
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C141
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$800.00
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WT Control Cell Line Expressing CAS:9 for Comparison
(50% discount for academic customers if ordered with the basic package)
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1 Cell Line
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C142
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$1,590.00
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Additional Clones
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1 Clone
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C143
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$250.00
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Additional Vials of Delivered Clones
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1 Vial
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C144
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$80.00
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Validation Service by Western Blot (Up to 10 Clones)##
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1 Service
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C145
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$975.00
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Off-Target Analysis by Whole Genome Sequencing
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Per Clone
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C146
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$4,000.00
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Additional rounds of selection and screening by Sanger Sequencing
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1 Screening
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C147
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$835.00
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HA Tag Validation (Up to 10 Clones)#
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1 Service
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C191
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$150.00
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STR Profiling of WT and Knock-in cells
(50% discount if ordered with the basic package)
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1 Service
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C287
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$150.00
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Using CRISPR to Knock-in Red Fluorescent Protein (RFP) gene into Human Embryonic Kidney Cells at the AAVS1 Safe Harbour Site
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After these passages puromycin was added to the media to select for cells with successful knock-in of the RFP-puromycin resistance CAS:sette.
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After 3-4 weeks of selection, >95% of HEK293 cells were expressing RFP.
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Figure 3. After transfection, HEK293 cells were passaged ten times to dilute out the episomal vector, then grown in the presence of puromycin for 4 weeks. Top Left) Cells transfected with both pCAS:-Guide-AAVS1 and pAAVS1-RFP-DNR were healthy after 4 weeks. Top Right) Over 95% of these cells imaged expressed RFP. Bottom Left) Control cells not transfected with the vectors died after puromycin treatment.
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Phase #3: Confirmation of Knock-in by Genomic PCR
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To confirm knock-in of RFP in the genomic DNA, a primer pair was designed with Primer 1 targeting the 5’ homology arm upstream of RFP and Primer 2 targeting within the RFP-Puromycin resistance CAS:sette.
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PCR product of 1.1 kb indicates successful knock-in at AAVS1 site; absence of PCR amplification indicates unsuccessful CAS:sette insertion (Figure 4).
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No PCR amplification was seen in the control cells (‘WT cell’) since Primer 2 could not anneal to the genomic DNA.
Figure 4. Genomic PCR was used to confirm the knock-in of RFP. In edited cells, both primer 1 and primer 2 can bind, resulting in a 1.1 kb PCR product. No PCR product is formed in WT cells as primer 2 cannot anneal to the genomic DNA.
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