磷酸化多肽价格及磷酸化多肽操作步骤
操作步骤：
1.剪一适当大小的硝酸纤维素膜并划成25px大小的方格;
2.用(磷酸化多肽价格)缓冲液A浸湿膜并放于一用同样缓冲液浸湿的滤纸上，使膜平坦;
3.用缓冲液B(含1mg/ml牛血清白蛋白)将样品稀释到合适的浓度，膜上每个点所加的样品其激酶活性在0.5～50pmol单位(1pmol单位代表每分钟转移1pmol 32P的酶量)，当酶比活性在1μmol/min·mg-1时则每个点应加纯酶0.5～50ng;
4.用微量加样器加1～5μl样品于膜上方格中央，待液滴消失后将膜面对含有缓冲液A(包括1～10mg/ml的底物)的Parafilm封口膜(贴于玻璃平板上)，在湿润环境中23℃作用30分钟。大片膜可密封于塑料袋中;
5.在100ml缓冲液A中洗膜并置于一新的Parafilm膜上(加有反应混合物溶液25μl/cm2)，23℃作用5～30分钟;
6.用(磷酸化多肽价格)缓冲液A 100ml洗膜4次，空气干燥后进行放射自显影?；蚯谐煞娇榻幸荷良剖俊?/div>
该方法在应用时*常见的问题是硝酸纤维素膜过载(指总蛋白或酶活力单位)。硝酸纤维素膜结合BSA的线性范围可达50μg/cm2(相当于每斑点5μg)，而结合容量可达500μg/cm2，如果样品本身造成蛋白质超载，则应降低稀释液中的BSA浓度。同时应注意不要加过量的酶，因为超过50pM单位即超过了该方法的线性范围，并可能影响硝酸纤维素膜邻近斑点的检测。该方法用于其它蛋白激酶检测时应适当变换测定条件。因蛋白激酶活性的斑点印迹方法与标准的液相方法在灵敏度、检测范围、线性等方面相当，所以可以代替后者进行常规检测。也在天然凝胶电泳和转移电泳后分析蛋白激酶活性的分布，可用于分析酶在不同发育阶段各组织表达的变化、cDNA克隆分析和突变体分析。
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